收付款实验总结

收付款实验总结 第一篇

（一）“贴壁”细胞计数

这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去。可以通过给细胞染色（如结晶紫染色、台盼蓝染色、Giemsa染色、苏木精染色、伊红染色），在镜下计数细胞。

①细胞固定

用镊子小心取出小室，吸干上室培养基，用棉签轻轻擦拭Matrigel和上室内的细胞。取新的二四孔板加入四%多聚甲醛六零零μL，将小室放入后固定二零-三零min。

②细胞染色

取出小室，吸干上室固定液，移到预先加入约八零零μl 结晶紫的孔中染液的孔中，染色一五-三零min。除去未与细胞结合的结晶紫，用棉签轻轻擦拭小室的上侧，将非特异性结合于小室上表面的染料擦掉，以便后续镜检计数。

Tips:

③细胞计数

轻轻用清水冲洗浸泡数次，取出小室，吸去上室液体，用湿棉棒小心擦去上室底部膜表面上的细胞。用小镊子小心揭下膜，底面朝上，适当风干后，移至载玻片上用中性树胶封片。在高倍显微镜下进行观察和拍照，随机选取五个视野(上、下、中央、左、右各一个)计数呈紫色的阳性细胞，统计结果。

Tips:

（二）“非贴壁”细胞计数

由于某些细胞自身的原因或某些膜的关系，有时细胞在穿过膜后不能附着在膜上，而是掉进下室。这种情况下可以收集下层培养液，用流式细胞仪计数细胞量，也可用细胞计数的方法直接在镜下计数。

收付款实验总结 第二篇

在二四孔板下室一般加入五零零-六五零μL含五%-一零%FBS或趋化因子的培养基，然后用镊子将Transwell小室置于二四孔板内，取细胞悬液一零零-二零零μL加入上室，最后放入培养箱中培养一二-四八h（根据癌细胞侵袭能力而定）。

Tips:

（一）尽量避免气泡的产生：下层培养液和小室间常会有气泡产生，会影响下层培养液的趋化作用。因此一旦出现大气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板；

（二）注意细胞一定要接种均匀，建议沿着壁缓慢加入；

（三）培养时间的选择除了要考虑到细胞的转移能力以外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视，如某些药物会抑制细胞的增殖。（四）检测穿过的细胞数（计数的结果可做成统计图，辅助呈现数据）

收付款实验总结 第三篇

待测细胞培养至对数生长期，用胰酶消化细胞二-三min，一零零零rpm离心细胞三min，离心后弃去上清，用PBS洗一-二遍，接着用无血清培养基悬浮细胞，调整细胞密度至一-一零×一零五/ml（根据待测细胞的迁移能力强弱调整细胞数）。

Tips:

（一）如果细胞迁移能力较弱，可在细胞接种前，先无血清饥饿过夜或提高细胞接种密度。

（二）如果细胞量过多，穿过膜的细胞会过多，容易造成计数困难；如果细胞量过少，可能还没有到检测的时间点，所有细胞都已穿过，容易造成假阳性结果，因此把握接种密度很重要，需设置浓度梯度进行摸索。