分析方法验证指导原则

第一篇：分析方法验证指导原则

中药质量标准分析方法验证指导原则

中药质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法是否适合于相应检测要求。在建立中药质量标准时，分析方法需经验证;在处方、工艺等变更或改变原分析方法时，也需要对分析方法进行验证。方法验证过程和结果均应记载在药品质量标准起草说明或修订说明中。

需验证的分析项目有：鉴别试验、限量检查和含量测定，以及其他需控制成分(如残留物、添加剂等)的测定。中药制剂溶出度、释放度等检查中，其溶出量等检测方法也应坐必要验证。

验证内容有：精确度、精密度(包括重复性、中间精密度和重现性)、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。应视具体方法拟定验证的内容。附表中列出的分析项目和相应的验证内容可供参考。

第二篇：化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则

一、概述

 保证药品安全、有效、质量可控是药品研发和评价应遵循的基本原则，其中，对药

品进行质量控制是保证药品安全有效的基础和前提。为达到控制质量的目的，需要多角度、多层面来控制药品质量，也就是说要对药物进行多个项目测试，来全面考察药品质量。一般地，每一测试项目可选用不同的分析方法，为使测试结果准确、可靠，必须对所采用的分析方法的科学性、准确性和可行性进行验证，以充分表明分析方法符合测试项目的要求，这就是通常所说的对方法进行验证。 方法验证的目的是判断采用的分析方法是否科学、合理，是否能有效控制药品的内在质量。 从本质上讲，方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通

过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。

 方法验证在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研究和质量控制的组

成部分。

 只有经过验证的分析方法才能用于控制药品质量，因此方法验证是制订质量标准的

基础。方法验证是药物研究过程中的重要内容。

二、方法验证的一般原则

 原则上每个检测项目采用的分析方法，均需要进行方法验证。

 方法验证的内容应根据检测项目的要求，结合所采用分析方法的特点确定。

同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。例如，采用高效液相色谱

法用于制剂的鉴别和杂质定量试验应进行不同要求的方法验证，前者重点要求验证专属性，而后者重点要求验证专属性、准确度、定量限。

三、方法验证涉及的三个主要方面



(一)需要验证的检测项目

 鉴别、

 杂质检查

 定量测定(含量测定、溶出度、释放度等)、

 其他特定检测项目 (分子量及分子量分布、生物活性等)

 鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其它物质，用于鉴别的分析方法

要求具有较强的专属性。

 杂质检查主要用于控制主成分以外的杂质，如有机杂质、无机杂质等。杂质检查可

分为限度试验和定量试验两种情况。用于限度试验的分析方法验证侧重专属性和检测限。

 用于定量试验的分析方法验证强调专属性、准确度和定量限。

 定量测定包括含量测定、制剂的溶出度测定等，由于此类项目对准确性要求较高，

故所采用的分析方法要求具有一定的专属性、准确度和线性。

 其他特定检测项目包括粒径分布、旋光度、分子量分布、生物活性等，由于这些检

测项目的要求与鉴别、杂质检查、定量测定等有所不同，对于这些项目的分析方法验证应有不同的要求。

(二)分析方法

 分析方法是为完成上述各检测项目而设定和建立的测试方法。

 分析方法原理

 仪器及仪器参数

 试剂

 系统适用性试验

 供试品溶液制备

 对照品溶液制备

 测定

 计算及测试结果的报告等

 测试方法

 化学分析方法

 仪器分析方法

 这些方法各有特点，同一测试方法可用于不同的检测项目，但验证内容可不相

(三)验证内容

 验证内容：

 方法的专属性

 线性

 范围

 准确度

 精密度

 检测限

 定量限

 耐用性

 系统适用性等

四、方法验证的具体内容



(一)专属性

 专属性系指在其他成分(如杂质、降解物、辅料等)可能存在下，采用的分析方法

能够正确鉴定、检出被分析物质的特性。

 通常，鉴别、杂质检查、含量测定方法中均应考察其专属性。如采用的方法不够专

属，应采用多个方法予以补充。



1、鉴别反应

 鉴别试验应确证被分析物符合其特征。

 专属性试验要求证明能与可能共存的物质或结构相似化合物区分，需确证含被分析

物的供试品呈正反应，而不含被测成分的阴性对照呈负反应，结构相似或组分中的有关化合物也应呈负反应。



2、杂质检查

作为纯度检查，所采用的分析方法应确保可检出被分析物中杂质的含量，如有

关物质、重金属、有机溶剂等。因此杂质检查要求分析方法有一定的专属性。 在杂质可获得的情况下，可向供试品中加入一定量的杂质，证明杂质与共存物质能

得到分离和检出，并具适当的准确度与精密度。

 在杂质或降解产物不能获得的情况下，专属性可通过与另一种已证明合理但分离或

检测原理不同、或具较强分辨能力的方法进行结果比较来确定。或将供试品用强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化的方法进行破坏(制剂应考虑辅料的影响)，比较破坏前后检出的杂质个数和量。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行色谱峰纯度检查。



3、含量测定

 含量测定目的是得到供试品中被分析物的含量或效价的准确结果。 在杂质可获得的

情况下，对于主成分含量测定可在供试品中加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰，并与未加杂质和辅料的供试品比较测定结果。

 在杂质或降解产物不能获得的情况下，可采用另一个经验证了的或药典方法进行比

较，对比两种方法测定的结果。

 也可采用破坏性试验(强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化)，得到含有杂质

或降解产物的试样，用两种方法进行含量测定，比较测定结果。

 必要时进行色谱峰纯度检查，证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分。

(二)线性

 线性系指在设计的测定范围内，检测结果与供试品中被分析物的浓度(量)直接呈

线性关系的程度。 线性是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量试验和含量测定均需要验证线性。 应在设计的测定范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列被测物质浓度系列进行测定，至少制备5个浓度。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，用最小二乘法进行线性回归。 必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算，并说明依据。



(三)范围

 范围系指能够达到一定的准确度、精密度和线性，测试方法适用的试样中被分析物

高低限浓度或量的区间。 范围是规定值，在试验研究开始前应确定验证的范围和试验方法。

 可以采用符合要求的原料药配制成不同的浓度，按照相应的测定方法进行试验。 范

围通常用与分析方法的测试结果相同的单位(如百分浓度)表达。涉及到定量测定的检测项目均需要对范围进行验证，如含量测定、含量均匀度、溶出度或释放度、杂质定量试验等。

 范围应根据剂型和(或)检测项目的要求确定。



1、含量测定范围应为测试浓度的80%～100%或更宽。



2、制剂含量均匀度范围应为测试浓度的70%～130%。根据剂型特点，如气雾

剂、喷雾剂，必要时，范围可适当放宽。



3、溶出度或释放度对于溶出度，范围应为限度的±20%;如规定限度范围，则

应为下限的-20%至上限的+20%。 对于释放度，如规定限度范围为，从1小时后为20%至24小时后为90%，则验证范围应为0～110%。



4、杂质杂质测定时，范围应根据初步实测结果，拟订出规定限度的±20%。如

果含量测定与杂质检查同时测定，用面积归一化法，则线性范围应为杂质规定限度的-20%至含量限度(或上限)的+20%。



(四)准确度

 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或认可的参考值之间接近的程度。有时也

称真实度。 一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定的检测项目均需要验证准确度，如含量测定、杂质定量试验等。准确度应在规定的范围内建立，对于制剂一般以回收率试验来进行验证。试验设计需考虑在规定范围内，制备3个不同浓度的试样，各测定3次，即测定9次，报告已知加入量的回收率(%)或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。



1、含量测定

 原料药可用已知纯度的对照品或符合要求的原料药进行测定，或用本法所得结果与

已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。 制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，必要时，与另一个已建立准确度的方法比较结果。



2、杂质定量试验

 杂质的定量试验可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质，

可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典方法或经过验证的方法。 如不能测得杂质的相对响应因子，可在线测定杂质的相关数据，如采用二极管阵列检测器测定紫外光谱，当杂质的光谱与主成分的光谱相似，则可采用原料药的响应因子近似计算杂质含量(自身对照法)。并应明确单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比(%)或面积比(%)。



(五)精密度

 精密度系指在规定的测试条件下，同一均质供试品，经多次取样进行一系列检测所

得结果之间的接近程度(离散程度)。

 精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。取样测定次数应至少6次。 精密度可以从三个层次考察：

 重复性

 中间精密度

 重现性



1、重复性

 重复性系指在同样的操作条件下，在较短时间间隔内，由同一分析人员测定所得结

果的精密度。 重复性测定可在规定范围内，至少用9次测定结果进行评价，如制备3个不同浓度的试样，各测定3次，或100%的浓度水平，用至少测定6次的结果进行评价。



2、中间精密度

 中间精密度系指在同一实验室，由于实验室内部条件改变，如时间、分析人员、仪

器设备、测定结果的精密度。 验证设计方案中的变动因素一般为日期、分析人员、设备。



3、重现性

 指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度。 当分析方法将被法定标准采用

时，应进行重现性试验。



(六)检测限

 检测限系指试样中的被分析物能够被检测到的最低量，但不一定要准确定量。 该验

证指标的意义在于考察方法是否具备灵敏的检测能力。因此对杂质限度试验，需证明方法具有足够低的检测限，以保证检出需控制的杂质。

六、对方法验证的评价



(一)有关方法验证评价的一般考虑

 总体上，方法验证应围绕验证目的和一般原则来进行，方法验证内容的选择和试验

设计方案应系统、合理，验证过程应规范严谨。 并非每个检测项目的分析方法都需进行所有内容的验证，但同时也要注意验证内容应充分，足以证明采用的分析方法的合理性。如杂质限度试验一般需要验证专属性和检测限，而对于精密度、线性、定量限等涉及定量测定的项目，则一般不需要进行验证。



(二)方法验证的整体性和系统性

 方法验证内容之间相互关联，是一个整体。因此不论从研发角度还是评价角度，方

法验证均注重整体性和系统性。 例如，对于鉴别项目所需要的专属性，一般一种分析方法不太可能完全鉴别被分析物，此时采用两种或两种以上分析方法可加强鉴别项目的整体专属性。在方法验证内容之间也存在较多的关联性，可以相互补充。如原料药含量测定采用容量分析法时，由于方法本身原因，专属性略差，但假如在杂质检测时采用了专属性较强的色谱法，则一般认为整个检测方法也具有较强的专属

性。

 总之，由于实际情况较复杂，在方法验证过程中，不提倡教条地去进行方法验证。  此外，越来越多的新方法不断被用于质量控制中，对于这些方法如何进行验证需要

具体情况具体分析，而不能照搬指导原则。

第三篇：分析方法的方法学验证

一、方法验证

1.准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为80%、100%和120%的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。 可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差(RSD)应不大于2.0%。

2.线性 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为： 在80%至120%的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数(R)不得小于0.998，Y轴截距应在100%响应值的2%以内，响应因子的相对标准差应不大于2.0%。

3.精密度 1)重复性 配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。 2)中间精密度 配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。

4.专属性 可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。

5.检测限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。

6.定量限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。

7.耐用性 分别考察流动相比例变化±5%、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、流速相对值变化±20%时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离;各条件下的含量数据(n=6)的相对标准差应不大于2.0%。

8、系统适应性 配制6份相同浓度的供试品溶液进行分析，主峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%，主峰保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离，主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。

二、 分 析 方 法 验 证 (Validation)

进行验证，以证明分析方法符合检测的目的和要求，这就是分析方法验证。从本质上讲，方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法符合检测项目的要求。方法验证在质量控制上有重要的作用和意义，只有经过验证的分析方法才能用于药品生产的分析检测，方法验证是制订质量标准的基础。 方 法 验 证 内 容 包括方法的专属性、线性、范围、准确度、精密度、检出限、定量限、耐用性和系统适用性等，检测目的不同验证要求也不尽相同。 1. 专 属 性 (Speciality / Specificity)

专属性是指分析方法能够将产品和杂质分开的特性，也称为“选择性”。对于纯度检测，可在标准品中加入产品中的已知杂质，或者直接用粗品，考察产品峰是否受到杂质的干扰，对于过程跟踪，可用反应体系样品来考察有没有其它的杂质干扰。必要时使用二极管阵列检测器或者质谱检测器进行色谱峰纯度检查。一般要求产品和杂质之间的分离度大于2.0。 2. 线 性 (Linearity)

线性是在设定的范围内，检测结果与样品中原料或产品的浓度呈线性关系的程度。线性是定量检测的基础，需要定量检测的项目都需要验证线性。一般用贮备液经过精密稀释，或分别精密称样，制备得到一系列被测物质的浓度(5个以上)，按浓度从小到大运行序列，以峰面积和浓度的函数作图，用最小二乘法进行线性回归计算，考察分析方法的线性。 3. 范 围 (Range)

范围指在能够达到一定的准确度、精密度和线性时，样品中被分析物的浓度区间。简单的说，范围就是分析方法适用的样品中待测物的浓度最大值和最小值。需要定量检测的分析方法都需要对范围进行验证，纯度检测时，范围应为测试浓度的80%～120%。 4. 准 确 度 (Accuracy)

准确度是指测定的结果与真实值之间接近的程度，所以也叫做“真实度”，需要定量得分析方法均需要验证准确度。准确度应在规定的范围内建立，对于原料药可用已知纯度的标准品或符合要求的原料药进行测定，必要时可与另一个已建立准确度的方法比较结果。 5. 精 密 度 (Precision)

精密度是指在规定条件下，同一均匀样品经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度。精密度一般用相对标准偏差(RSD)表示，取样检测次数应至少6次。 精密度可以从三个层次考察：重复性、中间精密度、重现性。

a、重复性(Repeatability)：是在相同的操作条件下、较短时间间隔内，由同一分析人员测定所得结果的精密度。一般是用100%浓度水平的样品测定6次的结果进行评价。

b、中间精密度(Intermediate precision)：同一实验室，在日期、分析人员、仪器等内部条件改变时，测定结果的精密度。 c、重现性(Reproducibility)：指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度。

6. 检 出 限 (Limits of Detection;LOD)

检出限是指样品中的被分析物能够被检测到的最低量，不需要准确定量。检出限体现了分析方法的灵敏度。检出限的测定可以通过对一系列已知浓度被测物的试样进行检测，以能准确、可靠检出被测物的最小浓度来确定，也可把已知浓度样品的信号与噪声信号进行比较，以信噪比为3：1时的浓度确定检出限，一般要求能够达到进样浓度的0.05%。

7. 定 量 限 (Limits of Quantitation / Quantification;LOQ) 定量限是指样品中的被分析物能够被定量检测的最低量，其测定结果需要一定的准确度和精密度，定量限体现了分析方法灵敏定量检测的能力。检测需要严格控制含量的杂质，必须考察方法的定量限，以保证杂质能够被准确定量。一般以信噪比为10：1时相应的浓度或进样量来确定定量限。

8. 耐 用 性 (Durability / Robustness)

耐用性是指测定条件发生小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，耐用性主要表明方法的抗干扰能力，主要的变动因素包括：流动相的组成、流速和pH值、色谱柱、柱温等。经试验，应说明小的变动能否符合系统适用性试验要求，以确保方法有效。 9. 系 统 适 用 性 试 验 (System Suitability) 液相色谱分析方法主要依赖高效液相色谱仪和色谱柱，在做方法验证时，有必要将高效液相色谱仪、色谱柱、流动相与实验操作、待测样品等一起当作完整的系统进行评估，并将系统适用性作为分析方法的组成部分，系统适用性便是对整个系统进行评估的指标。 一般系统适应性的要求为：分析方法能够达到0.05%的检出限;主峰的拖尾因子(T)0.95

分析方法开发与验证是一个整体，在实际工作中，一般是先开发分析方法，经过适当的优化以后再做方法验证，验证的部分内容在分析方法开发时就要做，比如说分析方法的专属性验证。分析方法验证并非必须验证所有的内容，只要注意验证内容充分，足以证明分析方法的合理性就可以了，如杂质限度检测一般只需要验证专属性和检出限，而精密度、线性、定量限等涉及定量测定的项目，则不需要验证。 有时需要对分析方法进行全面或部分的再验证。当原料药合成工艺发生改变时，可能引入新的杂质，杂质检查方法和含量测定方法的专属性就需要再进行验证，以证明有关物质检查方法能够检测新引入的杂质，且新引入的杂质对主成份的含量测定应无干扰。当分析方法发生部分改变时，如检测波长发生改变，则需要重新进行检测限、专属性、准确度、精密度、线性等内容的验证，以证明改变后的 分析方法的合理性、可行性

第四篇：定量分析方法的方法学验证

定量分析方法的方法学验证 定量分析方法的方法学验证

定量分析方法验证的目的是证明采用的含量测定方法适合于相应分析要求，在进行定量分析方法学研究或起草药品质量标准时，分析方法需经验证。

验证内容有：线性、范围、准确度、精密度(包括重复性和重现性)、检测限、定量限和耐用性等。

一，线性

线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物质浓度直接呈正比关系的程度。

应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，制备一系列供试品的方法进行测定，至少制备五份供试样品;以测得的响应信号对被测物浓度作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。回归方程的相关系数 ( r ) 越接近于 1 ，表明线性关系越好。

用 UV 法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，吸光度 A 一般在 0.3 ～ 0.7 ，浓度点 n = 5 ，用浓度 C 对 A 作线性回归，得一直线方程，方程的截距应接近于零，相关系数 r 应大于 0.9999 。

用 HPLC 法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液 ， 浓度点 n = 5 ～ 7 ，用浓度 C 对峰高 h 或峰面积 A 或被测物与内标物的响应值之比进行线性回归或非线性拟合(如 HPLC-ELSD )，建立方程，方程的截距应趋于零，相关系数 r 应大于 0.999 。

线性关系的数据包括相关系数、回归方程和线性图。

二，范围

范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。

范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果及要求确定。对于有毒的、具特殊功效或药理作用的成分，其范围应大于被限定含量的区间。

三，精确度

准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率 ( % ) 表示。准确度应在规定的范围内测试。用于定量测定的分析方法均需做准确度验证。

1. 测定方法的准确度

可用已知纯度的对照品做加样回收率测定，即于已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，依法测定。用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。

在加样回率收试验中须注意对照品的加入量与供试品中被测成分含有量之和必须在标准曲线线性范围之内;加入的对照品的量要适当，过小则引起较大的相对误差，过大则干扰成分相对减少，真实性差。

回收率 % = [(C-A)/B]*100%

式中， A 为供试品所含被测成分量; B 为加入对照品量; C 为实测值。

2. 数据要求

在规定范围内，取同一浓度的供试品，用 6 个测定结果进行评价;或设计 3 个不同浓度，每个浓度各分别制备 3 份供试品溶液进行测定，用 9 个测定结果进行评价，一般中间浓度加入量与所取供试品含量之比控制在 l ∶ 1 左右，其他两个浓度分别约为供试品含量的 80% 和 120% 。应报告供试品取样量、供试品中含有量、对照品加入量、测定结果和回收率 ( % ) 计算值，以及回收率 ( % ) 的相对标准偏差 (RSD) 或可信限。

四，精密度

精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间接近的程度。

1. 精密度的表示方法

气相色谱法和高效液相色谱法是对同一供试液进行至少五次以上的测定;精密度一般用相对标准偏差 (relative standard deviation, RSD) 表示： RSD= 标准偏差 / 平均值 ′ 100 %

精密度报告的数据应包括平均值、可信限及相对标准偏差。

一般在一天之内进行的精密度考察称为日内精密度 (inter-day variability) ;在三天之内进行的精密度考察称为日间精密度 (intra-day variability) 。

有时为了考察随机变动因素对精密度的影响，还需设计进行中间精密度试验，变动因素包括不同日期、不同分析人员和不同设备。

2. 重复性( repeatability )

是指在同一条件下对同一批样品，从样品供试品液制备开始，制备至少六份以上供试品溶液 ( 即 n>6), 或设计 3 个不同浓度，每个浓度各分别制备 3 份供试溶液，进行测定，计算其含量的平均值和相对标准偏差 (RSD) 。 RSD 一般应根据样品含量高低、含量测定方法和繁简进行制订，如含量很低一般不大于 5 %;如含量较高，则应从严要求。

3. 重现性( reproducibility )

是指在不同的实验室由不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时，通过协同检验得出重现性结果，协同检验及重现性结果均应记载在起草说明中。应注意重现性试验样品本身的质量均匀性和储存运输中的环境影响因素，以免影响重现性结果。

五，检测限

检测限是指试样中被测物质能被检测出的最低浓度或量。检测限是一种限度检验效能指标，即反映方法与仪器的灵敏度和噪音的大小，也表明样品经处理后空白 ( 本底 ) 值的高低。它无需定量测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。根据所采用的分析方法来确定检测限。

当用 GC 和 HPLC 法时，可用已知低浓度样品测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以 S / N = 2 或 S / N = 3 时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。检测限的报告数据应附图谱，说明测试过程和检测限结果。

六，定量限

定量限是指样品中被测物质能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定准确度和精密度。常用信噪比法测定定量限。一般以 S / N = 10 时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。

七，耐用性

耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法用于常规检验提供依据。开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性，样品提取次数、时间等。液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成比例或 pH 值，不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱，柱温，流速及检测波长等。气相色谱法变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体，柱温，进样口和检测器温度等。薄层色谱的变动因素有：不同厂牌的薄层板，点样方式及薄层展开时温度及相对湿度的变化等。

经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。

第五篇：药品质量标准分析方法验证

一、目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求。

二、用途

(一)药品质量标准起草时，分析方法需经验证。

(二)药物生产方法变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，分析方法需经验证。

三、需验证的分析项目

1.鉴别试验;

2.杂质定量或限度检查;

3.原料或制剂中有效成分含量测定;

4.制剂中其它成分(降解产物、防腐剂等)的测定;

5.溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法

四、验证内容

准确度、精密度(重复性、中间精密度和重现性)、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性

(一) 线性(Linearity)

在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。

•方法：应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列不同浓度标准溶液的方法进行测定(n≥5)。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。

•数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图

UV法：吸光度A一般在0.2～0.8，浓度点n=5。用浓度c对A作线性回归处理，得一直线方程，r应达到0.9999(n=5)，方程的截距应近于零。

HPLC法: 用精制品配制一系列标准溶液，浓度点n应为5～7，用浓度c对峰高h或被测物的响应值(峰面积A)之比进行回归处理，建立回归方程，r应大于0.999，截距应趋于零。

(二)准确度(accuracy)

准确度是指用该方法测定的结果与真实值接近的程度，用百分回收率表示。

测定回收率R(recovery)的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。 回收试验：空白+已知量的对照品(或标准品)测定，测定值为M

回收率R测定平均值空白100% 加入量

加样回收试验 ： 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品(或标准品)测定，测定值为MRMP100% A

数据要求：可向制剂中加入已知量的被测物对照品进行测定规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备高、中、低三个不同浓度样品各测三次。

(三)精密度(precision)

精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差(d)、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD) 表示。

相对标准偏差(RSD)，也称变异系数(CV)

RSDS100%S2xi

n

11. 重复性(repeatability):

在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度;在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作100%，至少测6次进行评价。

2. 中间精密度同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。

3. 重现性(reproducibility)不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。

数据要求：需报告RD，RSD和可信限。

(四)检测限(LOD)

检测限系指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。

1.非仪器分析目视法

用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。

2.信噪比法

用于能显示基线噪音的分析方法(仪器分析方法)，是把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比(S/N)3∶1或2∶1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。

(1)空白值=0时;①测定背景10次以上，求出标准差S空。②将S空乘以三倍;③在工作曲线上求出3 S空相对应的浓度X;即为方法的检出值;

(2)空白值不等于0;①测定背景10次以上，求出标准差S空;②在工作曲线上求出3 S空 相对应的浓度X; ③ 将求得的对应浓度值加上空白值即得该方法的检出限。

(五)定量限(LOQ)

指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度要求。

常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比(S/N)为10∶1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定，也可按1984年国际纯粹和应用化学联合会(IVPAC)规定：用仪器所测空白背景响应标准差(SD)的10倍为估计值，再经试验确定方法的实际测定下限。

仪器分析：通过测定一组空的样品的背景信号后计算标准差S。以1OS来估算定量限度。(以定量限度制备的样品来验证)

非仪器分析：通过分析己知被测物浓度的样品并确定一个样品中被测物可被准确和精密测定出的最低浓度(量)。

(六) 耐用性

指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。是衡量在正常情况下实验结果重现性的尺度。

分析方法重现性的测定是通过在不同的实验室内不同的实验者对同一样品的分别测试而获得的。(获得的这种再与正常检定下的精密度进行比较，从而确定该法的耐用性)

(七) 专属性

(八) 范围

•典型的变动因素有：被测溶液的稳定性，样品提取次数、时间等。

•液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成和pH值，不同厂牌或不同批号的同类色谱柱，柱温，流速等。

•气相色谱法变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体、柱温，进样口和检测器温度等。

经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。

含量测定需进行的方法学验证项目：准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性

五、各种含量测定方法对效能指标的要求

1. 容量分析法：用原料药精制品(含量>99.5%)或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于0.2%;进行回收率试验。回收率一般在99.7～100.3%之间。

2. UV法：用适当浓度的精制品进行测定，其RSD一般不大于应在98%～102%之间。

3. HPLC法：要求