bradford测蛋白浓度|bca测蛋白浓度

考马斯亮蓝法（Bradford 法）测定蛋白质浓度

1、试剂：

（1）考马斯亮蓝试剂：

考马斯亮蓝G —250 100mg 溶于50ml 95%乙醇, 加入100ml 85% H3PO4, 用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤. 最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G —250,4.7%（W/V）乙醇,8.5%（W/V）H3PO4.

（2）标准蛋白质溶液：

纯的牛血清血蛋白, 根据其纯度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋白溶液.

2. 器材：\x0b（1）可见光分光光度计 （2）旋涡混合器

3、标准曲线的制作

试管编号\x050\x051\x052\x053\x054\x055\x056

100ug/ml标准蛋白（ml ）\x050.0\x050.1\x050.2\x050.3\x050.4\x050.5\x050.6

0.15mol/L NaCl （ml ）\x051\x050.9\x050.8\x050.7\x050.6\x050.5\x050.4

考马斯亮蓝试剂 （ml ）\x055\x055\x055\x055\x055\x055\x055

摇匀,1h 内以0号管为空白对照, 在595nm 处比色\x05\x05\x05\x05\x05\x05\x05

A595nm\x05\x05\x05\x05\x05\x05\x05

以A595nm 为纵坐标, 标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug 、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug）, 在坐标轴上绘制标准曲线.

4、样品中蛋白质含量的测定

另取两支干净的试管（做一重复）, 加入合适浓度的待测样品, 使其测定值在标准曲线的范围内, 测定方法同上, 由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量.

注意事项：

1、 如果要求严格, 最好在试剂加入后的5~20min内测定光 吸收, 因为这段时间内颜色是最稳定的.

2、 若选择在旋涡混合器上混合, 注意不要太剧烈, 以免产生大量气泡而难于消除.