【基本染色方法】常用的染色方法
基本染色方法
更新时间:2005-12-20 浏览次数:37
一、革兰染色
本染色是最基本的染色法,可用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰阳性(紫色)和革兰阴性(红色)两类。
原理:
1、 等电点学说。
2、 化学学说。
3、 通透性学说。
试剂
1、结晶紫溶液
A液: 结晶紫 2g
95%乙醇 20ml
B液: 草酸铵 0.8g
蒸馏水 80ml
需在用前24 h将A液,B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。
2、碘液
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
将碘与碘化钾混合并研磨,加入少量水,使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至完全溶解。最后补足水量。
也可用少量蒸馏水,先将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。
3、脱色液:95%乙醇
4、复染液
A:贮存液:沙黄 2.5g
95%乙醇 100ml
B:应用液:A液 10ml
蒸馏水 90ml
(应用液也可用:石炭酸复红10ml加90ml蒸馏水)
染色方法
1、涂片经火焰固定,加结晶紫液染1min,清水冲去染液。(用滤纸吸去玻片上水分)
2、加碘液染1min,水洗。(吸去水分)
3、加脱色液,不时摇动约10~30秒,至无紫色脱落为止,水洗。(吸去水分)
4、加复染液,染30秒,水洗。(吹干)
5、镜检。
二、抗酸染色
抗酸染色直接用于痰标本时,可以适当增加标本涂片的厚度,以提高检出率。厚涂片时,须掌握染色时间。如果背景过深,影响镜检。(厚涂片的同时,涂薄片一张)。
原理
分枝杆菌细胞壁含脂质较多其中主要成份为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红的颜色,达到染色目的。
试剂
1、萋纳石炭酸复红溶液
碱性复红乙醇饱和溶液(碱性复红8克,溶于95%乙醇100亳升)
碱性复红乙醇饱和溶液: 10ml
5%石炭酸溶液: 90ml
2、脱色剂: 浓盐酸 3ml
95%乙醇 97ml
3、复染液(吕弗勒美蓝液)
美蓝乙醇饱和溶液(美蓝0.3g,溶于95%乙醇30ml中)
美蓝乙醇饱和溶液: 30ml
20%氢氧化钾: 0.1ml
蒸馏水: 100ml
染色方法
1、涂片经火焰固定,加石炭酸复红溶液,徐徐加热至有蒸汽出现,
切不可沸腾。染5 分钟(若染色奴卡菌需要延长时间),水洗(吸去水份)。
2、加脱色剂,不时摇动玻片至无色脱落为止,水洗(吸去水份)。
3、加复染液,染0.5~1分钟,水洗,吹干。
4、镜检。分枝杆菌呈红色,背景为蓝色。
三、异染颗粒染色
用于白喉棒状杆菌染色,异染颗粒可明显地被显示出来。
试剂
甲液: 甲苯胺蓝 0.15g
孔雀绿 0.2g
冰醋酸 1ml
95%乙醇 2ml
蒸馏水 100ml
将各染料先溶于乙醇,然后加入水与冰醋酸的混合液中,充分混合。静置24小时后过滤备用。
乙液: 碘 2g
碘化钾 3g
蒸馏水 300ml
先将碘化钾加入少许蒸馏水(约2ml),充分振摇,待完全溶解,再加入碘,使完全溶解后,加蒸馏水至300ml。
染色方法
1、涂片经火焰固定,加甲液,染3~5分钟,水洗(吸去水份)。
2、滴加乙液,染1分钟,水洗,吹干。
3、镜检,菌体呈绿色,异染颗粒呈蓝黑色。
四、墨汁染色
用于观察菌体有无荚膜结构,借此鉴定某些细菌,如新型隐球菌
试剂:
印度墨汁、国产优质墨汁或5%黑色素水溶液。
染色方法:
将标本与1 滴染色液在载玻片上混合,加上盖玻片,轻轻压一下使标本混合液变薄(尽量避免产生气泡),在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞。找到后,转换高倍镜确认。